关于ADC冻干制剂

ADC(Antibody-Drug Conjugate，抗体药物偶联物)是一类将单克隆抗体与细胞毒性小分子药物通过化学连接子共价偶联而成的新型靶向抗肿瘤药物。ADC是一种高度复杂的生物大分子，由于其同时具备抗体（蛋白质）的不稳定性；小分子毒素的化学不稳定性；连接子的水解敏感性，三者叠加，导致ADC在液体状态下极难长期保持稳定，冻干制剂可显著提升其长期储存稳定性。

残余水分作为冻干制剂的关键质量控制指标之一，一般使用经典的卡尔费休滴定法测定。ADC冻干制剂通常采用密封玻璃西林瓶包装，以固体粉末储存，水分含量目标值一般为0.5-2%，使用卡尔费休容量法或库仑法均可，具体方法的选择取决于待测样品的水分含量及可获取的样品量。卡尔费休滴定法测定过程中遇到的困难往往源于样品溶解度有限，在某些情况下还需考虑副反应的影响。根据冻干制剂组成及性质的不同，需采取相应措施以确保卡尔费休测定不受干扰。

目前，在各国的药典中（例如：USP <921>，EP <2.5.12>，中国药典四部通则<0832 水分测定>等），卡尔费休滴定法均被列为水分测定的标准方法。与其他水分测定方法相比，卡尔费休法是基于化学定量反应的水分测试方法，具有专属性强、重复性好、准确度高和适用范围广等优势。

实验技巧和建议

由于冻干制剂的水分含量极低（例如：每支中水分含量仅100µg），同时具有较强的吸湿性，因此水分测定需严格按照规范操作，条件允许时应在手套箱中称量样品，以排除环境空气中湿度的影响。特别是冻干粉极易吸潮，操作不当会导致测定结果偏高，这是最常见的误差来源之一。

冻干制剂直接进行水分测定很难保证全部溶解且不发生副反应，外部萃取法是其最合适的水分测试方法。外部萃取法是通过无水甲醇等溶剂将待测样品中的水分萃取出来，通常适用于溶解性较差、水分分布不均匀和辅料有干扰的待测样品水分含量测试。

容量法滴定可使用单组分试剂（可通过增加溶剂提高待测样品的溶解性）或双组分试剂（pH值范围更宽，反应更快，滴定度更稳定）。

库仑法分析仅能在样品经外部萃取后再进行，建议库仑滴定池阳极室中的已滴定溶液可作为溶剂或萃取剂使用；其优势在于无需考虑溶剂空白值，从而获得更准确的检测结果。

此外，冻干粉固体样品也可以采用卡氏加热炉法结合库仑法进行测定。卡氏加热炉的建议设置参数,温度：130 °C，设定时间：300秒。卡式炉法适用于溶解性较差、成分复杂、存在副反应、水分释放缓慢和吸湿性较强的待测样品水分测试。

对于含醛酮结构的待测样品，如：含有甲醛、乙醛、苯甲醛等醛类，以及含有丙酮、丁酮、环己酮等酮类的样品，建议采用有隔膜电极滴定池的水分测定仪，需选择醛酮样品的专用试剂：阳极液（货号：1.88062.0500）和阴极液（货号：1.88063.0010）。

一、卡尔费休容量法（单组分试剂）

2.仪器方法设置建议等

待测样品外部萃取和搅拌时间：120 秒

仪器参数设置：

极化电流 I(pol) = 20-50 µA，终点控制电位 U(EP) = 100-250 mV

滴定终止标准：漂移值 < 20 µL/min

建议取样量：0.1-1.0 g

3.操作步骤简介

为使样品充分溶解和水分全部萃取，建议待测样品外部萃取时间至少120 秒。首先将50mL滴定介质溶剂加入滴定池，用滴定剂预滴定至系统干燥。然后直接将待测样品倒入滴定杯中（通过称量西林瓶加样前后的质量确定准确的取样量）。启动滴定程序开始容量法滴定，仪器上直接读取待测样品的水分含量值。

二、       卡尔费休容量法（双组分试剂）

2.仪器方法设置建议等

待测样品外部萃取和搅拌时间：120 秒

仪器参数设置：

极化电流 I(pol) = 20-50 µA，终点控制电位 U(EP) = 100-250 mV

滴定终止标准：漂移值 < 20 µL/min

建议取样量：0.1-1.0 g

3.操作步骤简介

为使样品充分溶解和水分全部萃取，建议待测样品外部萃取时间至少120 秒。首先将50mL滴定介质溶剂加入滴定池，用滴定剂预滴定至系统干燥。然后直接将待测样品倒入滴定杯中（通过称量西林瓶加样前后的质量确定准确的取样量）。启动滴定程序开始容量法滴定，仪器上直接读取待测样品的水分含量值。

三、卡尔费休库仑法

（有隔膜电极滴定池）

1.所需试剂（Aquastar®库仑法滴定剂，降本增效：只需用1瓶试剂，无需区分阴极液和阳极液）

2.仪器方法设置建议等

滴定仪参数设置建议，用于终点指示，例如：

极化电流I(pol) = 5-10 μA

终点控制电位U(EP) = 50-100 mV

滴定终止标准:  漂移值< 20 μg/min
建议取样量：1 支（例如：西林瓶包装）

3.操作步骤简介

将卡尔费休试剂分别加入有隔膜滴定池的阴极室和阳极室，启动库仑法滴定仪，将溶剂预滴定至干燥。完成预滴定并待漂移值稳定后，用注射器从阳极室抽取已滴定溶液并重新注入池中，重复此操作数次以干燥注射器。当将润洗液注入库仑滴定池后漂移值不再升高时，再次从阳极室抽取已滴定溶液，通过隔垫注入待测样品中（样品质量为： M，加溶剂后总质量为： M+M1）。通过振荡（或超声水浴）溶解样品，再用同一注射器抽取萃取液，注入滴定池（通过注射器注入前后称重确定准确的取样量），启动滴定程序开始进行库仑法测定，测定结果对应该部分样品的水分含量（A）。

待测样品中水分浓度的计算公式：水分（%）= A（%）×（M + M1）/ M

四、卡尔费休库仑法（无隔膜电极滴定池）——1.所需试剂 (Aquastar®库仑法滴定剂，降本增效，一站式采购)

备注：如上卡尔费休试剂可根据您的实验室条件二选一即可。

2.仪器方法设置建议等

滴定仪参数设置建议，用于终点指示，例如：

极化电流I(pol) = 5-10 μA

终点控制电位U(EP) = 50-100 mV

滴定终止标准:  漂移值< 20 μg/min
建议取样量：1 支（例如：西林瓶包装）

3.操作步骤简介

将卡尔费休试剂分别加入滴定池中，启动库仑法滴定仪，将溶剂预滴定至干燥。完成预滴定并待漂移值稳定后，用注射器从阳极室抽取已滴定溶液并重新注入池中，重复此操作数次以干燥注射器。当将润洗液注入库仑滴定池后漂移值不再升高时，再次从阳极室抽取已滴定溶液，通过隔垫注入待测样品中（样品质量为： M，加溶剂后总质量为： M+M1）。通过振荡（或超声水浴）溶解样品，再用同一注射器抽取萃取液，注入滴定池（通过注射器注入前后称重确定准确的取样量），启动滴定程序开始进行库仑法测定，测定结果对应该部分样品的水分含量（A）。

待测样品中水分浓度的计算公式：水分（%）= A（%）×（M + M1）/ M

五、其他常用产品推荐

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