GLP-1靶向治疗药物的市场需求快速增长，反向推动了药品生产企业降低成本。此外，不当的处理和储存也可能导致肽治疗药物中产生杂质。通过配制药房分销司美格鲁肽等引起了人们的担忧。这些治疗药物若未得到妥善处理，可能通过此途径引入杂质，从而给患者带来风险。此前已证实，在司美格鲁肽配制过程中，可能存在因接触微量甲醛而产生特定杂质的风险，这种接触会导致N-末端组氨酸环化，使分子量发生12Da的改变。本应用展示了使用BIOshell™ A160 Peptide PCS-C18 15 cm x 2.1 mm, 2.7 µm（50659-U）色谱柱分离司美格鲁肽及其N-末端修饰杂质。PCS C18表面带有正电荷，能在LCMS的弱酸性条件下改善峰型。本方法能够对复杂GLP-1样品中潜在杂质进行高通量分析，从而评估患者风险。

色谱条件

色谱图

图1.100ng研究级司美格鲁肽的色谱图

在相同的分析条件下检测了100ng配制型司美格鲁肽样品和100ng商品化司美格鲁肽 (Ozempic®) 样品。TIC图分别显示在图2和图3中，图4展示了N端组氨酸修饰水平的放大比较。

图2.100ng配制型司美格鲁肽的TIC图。

图3.100ng商品化司美格鲁肽 (Ozempic®) 的TIC图。

图4.配制型司美格鲁肽 (A) 和商业样品 (Ozempic®) (B) 的放大比较图。配制型司美格鲁肽样品显示N端组氨酸修饰（峰2）显著增加。

如图4所示，从配制样品中可以观察到大量的N端组氨酸修饰。而在药用级 (Ozempic®) 样品中观察到的量要少得多。为了评估每种分析物的相对含量，采用了两种不同的方法。第一种方法使用Freestyle软件比较解卷积峰的丰度，计算每种物质的相对量，包括已鉴定的Na+和K+加合物。第二种方法涉及对TIC中的峰进行积分。

表3. 计算得出的修饰型 N 端组氨酸相对于FLP的相对量及其计算方法。

如表3所示，配制样品中N端组氨酸修饰的水平比Ozempic®样品高3-4倍。该浓度超过了FDA关于肽药物中允许杂质水平的指南标准，并对患者构成风险。目前尚不确定是否已针对效价和免疫原性评估了该特定修饰。很明显，任何含有该N端组氨酸的GLP-1激动剂，若制造或处理不当，都容易发生这种修饰。这种可能性包括利拉鲁肽、司美格鲁肽、度拉糖肽、艾塞那肽、利司那肽等。

BIOshell™ A160 Peptide PCS-C18在弱离子对条件下为碱性化合物保持了优异的峰形和分离度，使得在各种生物制药制剂中能够高效检测杂质。利用BIOshell™ A160 Peptide PCS-C18色谱柱，能够检测到配制型司美格鲁肽样品中超过FDA指南标准的杂质，并且提出了一种方法学，该方法可用于筛选其他配制型司美格鲁肽样品的杂质相关风险。

BIOshell™ A160 Peptide PCS-C18

色谱柱特点：

使用低离子强度流动相条件，实现酸性、碱性和中性肽的高分离度

改善峰形，提高碱性化合物的载样能力

能够在SPP色谱柱上高流速使用，提高样品通量

由于该色谱柱所需的流动相添加剂量较低，LC-MS灵敏度得到提高，可进行更准确的分析

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