寡核苷酸是由2-30个核苷酸残基通过磷酸二酯键连接而成的短链核酸片段，广泛用于生物治疗（包括基因治疗、RNA干扰和反义寡核苷酸疗法）而备受关注。这些化合物的治疗效果高度依赖其纯度和结构完整性，因此建立稳健的分析方法对质量控制至关重要。

HPLC法是监控寡核苷酸合成的关键技术，能为其纯度和结构完整性提供有价值的参考。然而，由于寡核苷酸结构复杂且存在杂质，传统的HPLC方法在分离寡核苷酸时面临挑战。提高 pH 和温度的条件会进一步增加分离难度，因为传统全孔颗粒（FPP）色谱柱的硅胶填料通常不适合此类条件。

BIOshell™ A120 Oligo C18色谱柱采用熔融核Fused-Core®颗粒技术，具有快速、高效的特点。表面改性的有机硅烷，具有耐碱性，在使用高pH值分离寡核苷酸时具有优异的稳定性，这项创新技术有助于开发稳健的方法，改善碱性化合物的分离效果。碱性化合物在低 pH 条件下通常峰形不佳、保留不足等问题。BIOshell™色谱柱表面惰性的硬件，很好的解决了样品吸附问题，可用于生物惰性系统。

BIOshell™ Å120 Oligo C18色谱柱特点

· 120 Å孔径：能分离长达60个碱基的寡核苷酸

· 高pH值和高温条件下出色的稳定性：专为分离寡核苷酸而设计

· 兼容性：与UHPLC和质谱兼容的键合相

· 硬件经表面惰性处理：降低样品吸附

· 键合相：表面修饰的二甲基十八烷基硅烷
颗粒大小: 2.7 μm

· 孔径: 120Å

· USP分类: L1

· 碳载量: 5.6%

· 表面积: 75m2/g

· 是否封端: 是

· 柱温（低pH）: 2/90 °C，柱温（高pH）: 9/85 °C

对比实验

与全多孔色谱柱相比，BIOshell™ A120 Oligo C18柱在分离寡核苷酸方面表现出更优异的性能。如下图，在高pH条件下，BIOshell™ A120 Oligo C18和其他供应商的寡核苷酸色谱柱分离不同长度的寡核苷酸混合物。在对比色谱柱上，由于全多孔色谱柱色谱柱扩散路径增加，全多孔色谱柱峰形较差，20个碱基及以上的低聚物出现拖尾。由于BIOshell™ Fused-Core®颗粒色谱柱的快速和高柱效，相同样品在BIOshell™色谱柱上无拖尾。

出峰顺序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer， 6. 40 mer ，7. 50 mer， 8. 60 mer

色谱条件：

色谱柱： BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)

对比柱：Oligo 130A C18,1.7um,2.1*50mm

流动相A：100mM TEAA, pH 8.5

流动相B：乙腈

梯度时间：

流速：0.5 mL/min

背压：BIOshell™140 bar, 对比柱255bar

柱温：60 °C

进样体积：1.0 μL

样品溶剂：10mM Tris HCl/1mM EDTA

检测波长：UV/PDA, 254 nm

流通池：1 μL

采集频率100 Hz

响应时间0.025 s

长寡核苷酸的分离：

寡核苷酸的分离：从20mer - 到100mer

使用BIOshell™A120 Oligo C18 INERTProve™色谱柱可以实现单链DNA（ssDNA）寡聚体的分离。如示例所示，这些色谱柱成功分离100-mer的寡核苷酸，展示了其精度和效率，以及处理复杂且长序列的能力。

分离寡核苷酸混合物

在高pH条件下使用BIOshell™ A120 Oligo C18色谱柱，可以在5分钟内分离出含有6种不同寡核苷酸的样品。

出峰顺序：1.20 mer， 2. 15 mer ，3.12 mer ，4. 25 mer， 5. 33 mer， 6. 12 mer

色谱条件：

色谱柱：BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.（70003-U）

流动相A：100mM TEAA, pH 8.5

流动相B：乙腈

梯度时间：

流速：0.4 mL/min

背压：142 bar

柱温：50 °C

进样体积：1 μL of Oligonucleotide Performance Standard Mix, 12-33 NT

样品溶剂：10mM Tris HCl/1mM EDTA

检测波长：PDA, 254 nm

流通池：1 μL

采集频率：100 Hz

相应时间：0.05 sec.

分离不同大小寡核苷酸

以下是分离寡核苷酸标准混合物(含有10-60个ssDNA)的应用。使用了乙酸三乙胺(TEAA)和乙腈梯度洗脱。在3.5分钟内，使用BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)，可分离长达60个碱基的寡核苷酸，并获得优异的峰型和分离。

出峰顺序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer ，6 .40 mer ，7 .50 mer ，8. 60 mer

优异的批间重现性

使用4个不同批次的色谱柱，对含10-60个不同长度碱基的单链DNA样品进行分析。

出峰顺序：1. 10 mer， 2. 15 mer ，3. 20 mer ，4. 25 mer ，5. 30 mer ，6. 40 mer ，7. 50 mer ，8. 60 mer

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