“好马配好鞍” ，如何给LC-MS仪器选六氟异丙醇
更新时间：2025-12-25 浏览次数：18
六氟异丙醇是LC-MS仪器分析中的“多面手"，它通过独特的物理和化学性质，可以大大改善液相色谱的分离效果和质谱的电离效率，尤其在对强极性化合物、碱性化合物（比如：多肽、蛋白质、胺类药物等）的分析中表现尤为突出。
1. 改善色谱峰形，作为离子对试剂和硅醇基掩蔽剂，可显著改善碱性化合物的峰拖尾问题，提高分离度和重现性。
对于含有碱性基团（如：氨基化合物），它们容易与色谱柱固定相发生强烈的相互作用，导致峰形拖尾、保留时间不稳定等问题。此时，六氟异丙醇可作为强离子对试剂和掩蔽剂。
六氟异丙醇的氟原子具有强吸电子效应，使其羟基（-OH）的酸性非常强（pKa ~9.3），容易解离，解离后的阴离子可以与带正电的分析物（如：质子化的胺类）形成疏水性的离子对；六氟异丙醇本身能与固定相表面的硅醇基结合，形成一层“保护层"，阻止分析物与硅醇基发生不必要的相互作用。
2. 增强质谱检测器的信号，促进去溶剂化和质子化，提高ESI+模式下的电离效率和响应强度，抑制加合物形成。
促进去溶剂化：六氟异丙醇具有较低的沸点，在电喷雾的液滴蒸发过程中更容易挥发，有助于加速液滴分裂和离子从液滴中释放出来，从而提高电离效率；促进质子化：六氟异丙醇的酸性使其容易为溶液提供质子（H⁺），促进分析物的质子化过程，从而增强正离子模式下的信号；抑制钠加合物形成：对于一些化合物，容易形成[M+Na]⁺等加合离子，导致信号分散。六氟异丙醇可以通过其独特的相互作用，抑制这些加合物的形成，提高信噪比。
3. 作为缓冲盐或添加剂，可替代传统的具有挥发性的缓冲盐。
与传统缓冲盐（如：磷酸盐）不同，六氟异丙醇及其常见的配对阳离子（如：三乙胺、二异丙基乙胺等）都具有高挥发性，这意味着它们不会在离子源内结晶沉积，避免质谱仪器的污染和信号抑制，非常适合于LC-MS仪器分析。
4. 在蛋白质组学、多肽分析中的应用优势。
分析酶解后的多肽混合物通常带有多个碱性氨基酸（如：精氨酸、赖氨酸等），建议可通过反相色谱的流动相中添加少量的六氟异丙醇，通常与三乙胺或甲酸铵配对，如： 0.1% 三乙胺 + 0.1% 六氟异丙醇），可以极大改善多肽分析的峰形和分离度，提高质谱检测的灵敏度，目前这种组合已成为蛋白质组学中一种非常常见的流动相添加剂。
配制浓度：
通常使用浓度较低，在5-20 mM（约0.1% v/v）范围内，过高浓度可能抑制电离或损坏色谱柱（尤其是硅胶基质）。
实验室安全防护：
具有毒性和刺激性，对眼睛、皮肤和呼吸道有危害毒性，使用时需在通风橱内操作，并需妥善处理废液。
色谱柱兼容性的要求：
对大多数反相C18柱兼容，但长期使用可能对某些类型的色谱柱的使用寿命会有影响。
pH值：
六氟异丙醇的加入会降低流动相的pH值，需综合考虑其对化合物保留作用的影响。
1. 首先，选择高纯度的试剂
LC-MS是一种高灵敏度的分析技术，流动相中的任何杂质都会直接进入离子源，产生高背景噪音、基线抬升、甚至掩盖目标分析物的信号。建议选择LC-MS级六氟异丙醇，普通分析纯或合成级的六氟异丙醇含有大量的杂质，如：非挥发性杂质会在离子源内不断积累和碳化，污染离子源、毛细管、锥孔等部件，导致灵敏度持续下降，需要频繁清洗和维护；有机杂质：有机污染物会产生额外的色谱峰和背景离子，干扰目标化合物的定性和定量；金属离子杂质：金属离子污染会与分析物形成加合物，导致信号分散、灵敏度降低，并增加谱图的复杂性。
2. 同时，建议选择高纯度的配对试剂
六氟异丙醇通常不单独使用，而是与一种挥发性碱配对形成缓冲体系，常用的是三乙胺、二异丙基乙胺等。由于六氟异丙醇是酸性的（pKa ~9.3），单独使用会使流动相pH过低。加入挥发性碱可以调节pH值，优化分离选择性，它们共同作用是六氟异丙醇的阴离子与分析物的阳离子形成离子对，而有机碱的阳离子则与固定相硅醇基结合，共同实现改善峰形的效果。建议配对试剂也选用LC-MS级试剂，如：LC-MS级三乙胺等。
3. 最后，需考虑溶剂兼容性的要求
六氟异丙醇需要与LC-MS流动相的其他组分兼容。水相：六氟异丙醇与水互溶，可以方便地加入到水相流动相（如：水/乙腈或水/甲醇体系）中；有机相：它也与乙腈（ACN）、甲醇（MeOH）等常用有机溶剂互溶。
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